生物药研发、临床免疫原性分析

患者对药物的免疫反应会导致药物水平治疗浓度下降，进而影响药物的生物利用度。为了评估生物药物或其活性成分的药代动力学、药效学及安全性，有必要对其免疫原性（Immunogenicity）进行评估与监测。免疫原性分析是生物制剂临床研发中的重要部分，临床和非临床研究通常是通过对药物引起的抗药物抗体(Anti-drug antibody, ADA)的检测和确认来评估药物的免疫原性。

因于免疫原性会严重影响药物的有效性和安全性，药监部门要求所有生物治疗性药物都要进行免疫原性检测，FDA对免疫原性的检测给出的具体要求：高灵敏度、高特异性、高稳定性及高亲和力。ADA的检测和确认比较复杂，检测结果会受到所使用的分析方法的影响。目前评估免疫原性的方法学包括不同类型的免疫分析平台：如传统酶联免疫吸附分析(ELISA, 图1a、b)、电化学发光免疫分析(ECL, 图1c )和放射免疫分析（RIA, 图1d），以及不同的ELISA检测形式，如直接、间接、桥接和竞争ELISA等。

图1 不同检测抗药物抗体免疫学平台原理

反义寡核苷酸（Antisense oligonucleotides , ASOs）是一种单链寡核苷酸分子，具有干扰mRNA和调节蛋白质表达的性能，其比重组蛋白小得多，但仍能够在患者体内产生ADA，因此开发一种符合监管部门要求的人类血液样本中ADA的检测方法往往具有挑战性。近日，汉腾生物欧洲子公司FyoniBio的Hans Baumeister博士在TIDES USA 2022上分享了“Establishment of an assay to assess the immunogenicity of a therapeutic antisense oligonucleotide in clinical samples” （应用临床样本建立和评估针对治疗性ASO药物的免疫原性检测）的墙报，引起业内公司的极大兴趣。

FyoniBio基于Meso Scale Discovery (MSD) 的电化学发光（ECL）平台检测临床样品中的ADA。并分别对桥式和双抗夹心ELISA形式进行检测评估。在酸解预处理后，使用生物素化的ASO药物作为捕获试剂，然后将待检样本加到链霉亲和素涂布的平板上，钌离子(sTAG)标记的ASO药物或检测试剂A、B和C用于检测（图2）。

图2 基于MSD ECL平台开发的ADA检测

使用兔多抗对选定阳性对照组（PC）进行方法学优化。结果显示，与使用检测试剂B或桥式ELISA相比，带有检测试剂C的双抗夹心ELISA检测结果最佳，抗ASO药物抗体的检测灵敏度为10 ng/mL，且该方法可耐受高达100 ng/mL的ASO血药浓度（图3）。

图3 抗ASO药物抗体检测结果

监管机构对临床/临床前样品进行免疫原性分析的关注度越来越高，FDA已发布《治疗性蛋白产品的免疫原性检测——开发和验证用于抗药物抗体检测的分析方法》指南，为在临床试验中评估治疗性蛋白产品的免疫原性提供监管指导，所以开发和建立可靠的免疫原性分析方法不仅为临床免疫原性检测提供早期指导，同时也能助力客户加快推进药物研发进程。